液相色譜流動(dòng)相的選擇
作者:技術(shù)部 來(lái)源:安恒達(dá) 瀏覽: 發(fā)布時(shí)間:2013-04-22 14:55
2、秘訣1:由強(qiáng)到弱： 一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試 驗(yàn)， 這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑(乙腈或甲醇)的比例。
秘訣2:三倍規(guī)則 ：每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規(guī)則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調(diào)整的過(guò)程中，注意觀察各個(gè)峰的分離情況。
秘訣3:粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)：當(dāng)分離達(dá)到一定程度，應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%，并據(jù)此規(guī)則逐漸降低調(diào)整率，直至各組分的分離情況不再改變。
3、含緩沖鹽的流動(dòng)相最好當(dāng)天用完，不要留置過(guò)夜，用不完也要倒掉，這是為了保護(hù)好機(jī)子起見(jiàn)，流動(dòng)相的保存期限與緩沖鹽的濃度有關(guān)系，越濃越不宜保留，總之，我認(rèn)為緩沖鹽溶液都不宜保留超過(guò)24小時(shí)，HPLC用緩沖鹽時(shí),由于泵頭內(nèi)的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細(xì)小鹽粒非常堅(jiān)硬,它附著在藍(lán)寶石活塞桿上,隨著藍(lán)寶石活塞桿的往復(fù)運(yùn)動(dòng),容易產(chǎn)生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。
4、緩沖鹽析出的狀況確實(shí)很麻煩，我們現(xiàn)在一般都采用有機(jī)鹽類替代無(wú)機(jī)鹽，磷酸氫二鉀代替磷酸二氫鉀，不僅緩沖液配制方便，而且泵頭也比較容易清洗干凈，有利于保護(hù)泵頭。